Uso de fluidos do processamento de leitões para o diagnóstico de PRRS

Introdução

Nos últimos anos, a melhoria das amostras e das técnicas de diagnóstico facilitaram o processo de recolha de amostras na exploração. O uso de técnicas de agrupamento de sangue e dos fluidos orais são dois exemplos dessas melhorias. Contudo, veterinários e produtores estão sempre a procurar técnicas que sejam mais sensíveis, baratas e rápidas para rastrear explorações. Uma possibilidade será usar as tarefas rotineiras, como o processamento de leitões, já que a castração e o corte de caudas são parte da rotina de uma exploração de reprodutoras. Nós propomos usar, como amostra, o fluido do processamento de leitões (FP), o líquido acumulado no balde onde os tratadores recolhem as caudas e os testículos durante a rotina. O objectivo deste estudo foi avaliar a validade da análise dos fluidos do processamento mediante PCR em tempo real para avaliar o estatuto para o vírus do Sindroma Reprodutivo e Respiratório Suíno (PRRSv) numa exploração de porcas.

Materiais e métodos

A amostragem ocorreu após o aparecimento de um surto numa exploração que previamente era negativa. Seleccionaram-se dez ninhadas por semana de diferentes partos e recolheu-se a amostra durante o processamento (aos 3 dias de vida) durante 8 semanas consecutivas. As ninhadas foram seleccionadas convenientemente para ter uma boa representação espacial da sala e dos partos. Recolheram-se amostras de sangue de todos os leitões das ninhadas seleccionadas e analisaram-se como amostra comparativa ou "gold standard". Os testículos e as caudas de cada ninhada foram guardados em sacos de plástico com fecho Zip. Os tecidos permaneceram nos sacos durante um mínimo de duas horas. Depois, extrairam-se os fluidos com uma pipeta estéril e foram guardados em tubos de soro estéreis. Ambas as amostras, sangue e PF, foram centrifugadas na exploração e transportadas refrigeradas para o laboratório. Todas as amostras foram analisadas por PCR em tempo real.

Figura 1. Caudas e testículos em saco de plástico com fecho Zip.

Resultados e discussão

Construiu-se uma tabela 2x2 (tabela 1) para comparar os resultados do soro e do FP. Uma ninhada era considerada positiva quando, pelo menos, um dos seus leitões era positivo. Os positivos foram categorizados com base num valor de Ct negativo com um limite inferior a 37,5 em vez do convencional Ct de 40, para poder incluir na análise amuestras que estiveram num intervalo suspeito, um Ct de 35 a 40. A sensibilidade (95% Intervalo de Confiança, CI) e a especificidade (95% CI) da técnica foram 83% (63-95%) e 92% (82-98%) respectivamente. A concordância entre os dois tipos de técnicas foi bom (Kappa: 0,76 (95% CI: 0,53-0,98%)). Detectaram-se quatro falsos positivos e 4 falsos negativos. O soro dos leitões dos falsos negativos teve uma carga vírica baixa (Cts alto) e, quando essas amostras foram diluídas, os seus Cts entraram num intervalo negativo. Apesar de que a transferência de FP foi levada a cabo de uma forma extremamente cuidadosa, pode-se ter produzido alguma contaminação cruzada, pois observámos a presença destes 4 falsos positivos.

Houve diferenças estatísticas (p<0,05) entre a % de FP positivos quando se compararam os resultados das porcas de poucos partos (primeiro e segundo parto) vs porcas com mais partos (mais de dois partos) sendo as porcas mais jovens as que tiveram maior percentagem de animais positivos. Estes resultados estão de acordo com o encontrado por Cano et al. (2008) quando tentaram identificar os indicadores de risco associados com uma maior probabilidade de detecção de leitões positivos ao PRRSV.

Os FP foram positivos inclusive nos casos em que apenas um leitão da ninhada era positivo, demonstrando assim que os FP são uma ferramenta sensível para detectar o que se está a paasar nas ninhadas e, portanto, na exploração. Ao mesmo tempo, estes resultados demonstram a importância de recolher os testículos e as caudas no momento de reduzir a disseminação da doença. Além disso, foi possível recuperar e sequenciar PRRSv a partir das amostras de FP.

Uma limitação deste estudo é que todas as amostras foram recolhidas de uma única exploração.

Claro que estes resultados e o uso desta técnica apenas podem ser aplicáveis nos países onde a castração e o corte de caudas são permitidos. Noutras regiões, onde as regulamentações de bem-estar animal recomendam o uso da cauterização durante o corte de caudas, serão necessários mais estudos para elucidar sobre as possibilidades de uso deste tipo de amostra como método de diagnóstico.

Tabla 1. Tabela 2x2 com o estatuto da ninhada, utilizando o soro como amostra comparativa.

Conclusão

O fluido do processamento é uma amostra efectiva para detectar PRRSv em leitões, inclusive quando tenha passado um tempo significativo desde o surto (~ 6 meses), especialmente em ninhadas de porcas de poucos partos. A outra implicação detectada é que os testículos e caudas devem ser recolhidos num balde pois podem potencialmente disseminar o PRRS pela maternidade.