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A eliminação do vírus PRRS num animal infetado ocorre através de secreções nasais, saliva, urina, fezes, sangue, leite e sémen, sendo que a duração do período de eliminação varia consoante o tipo de secreção, a idade do animal, o seu estado imunitário e a estirpe específica de PRRS. O vírus pode persistir por longos períodos no tecido linfóide (existem relatos de persistência até 251 dias após a infeção nas amígdalas), mesmo meses após a eliminação da virémia.
Num programa de controlo da PRRS é essencial selecionar tipos de amostras e técnicas de colheita que permitam a deteção de animais portadores nas fases finais de eliminação viral, sendo o tecido linfóide e a saliva as amostras de eleição.
O desenvolvimento de técnicas de colheita de fluido oral representou um avanço significativo no aumento da capacidade de deteção, especialmente em situações de baixa prevalência e fases avançadas da infeção. No entanto, a presença de inibidores neste tipo de amostras exige uma preservação ideal antes da RT-qPCR. Além disso, as cargas virais (cT) são frequentemente elevadas, o que limita a sequenciação viral.
O método de raspagem das amígdalas descrito há alguns anos apresentava uma limitação significativa: exigia a abrasão da amígdala para a obtenção do exsudato, procedimento realizado com instrumentos como colheres, o que dificultava a sua aplicação prática em animais vivos. Em 2024, Peng Li (Universidade de Iowa) publicou uma adaptação do método de raspagem numa técnica menos invasiva denominada esfregaço das amígdalas, ou zaragatoa amigdaliana, demonstrando uma maior capacidade de deteção do vírus em comparação com amostras de soro de porcas infetadas.
Posteriormente, este método foi avaliado em várias explorações em Aragão e na Catalunha, seguindo o protocolo descrito por Peng Li (2024), com algumas modificações. Foram também utilizados cateteres de inseminação com ponta de esponja, conforme descrito por Peng Li, mas foram introduzidas as seguintes variações:
- não foi utilizada gaze para se fixar na ponta do cateter;
- o animal foi imobilizado durante a recolha das amostras para facilitar a recolha direta da amígdala, o que seria difícil em animais em movimento;
- as amostras foram recolhidas em tubos Falcon para processamento.
O estudo foi realizado em dois tipos de explorações:
- exploração de engorda com leitões naturalmente infetados durante o período de transição;
- explorações de recria para futuras reprodutoras, previamente infetadas naturalmente durante a fase de transição, com o objetivo de detetar portadores crónicos e prevenir a introdução do vírus quando transferidos para explorações de produção.
Na primeira exploração, o parque foi considerado a unidade epidemiológica. Foram selecionados cinco animais de cada parque, para recolha simultânea de sangue e zaragatoa das amígdalas, além de uma amostra agrupada de fluido oral.
O objetivo do estudo foi estimar a capacidade de deteção (ausência ou presença) ao nível do grupo utilizando amostras agrupadas de sangue, zaragatoas às amígdalas e fluidos orais.
Nas outras duas explorações foram recolhidas amostras individuais de soro, raspagens traqueobrônquicas e zaragatoas das amígdalas, e os resultados analíticos foram comparados para cada animal.
Todas as amostras foram analisadas por RT-qPCR, considerando-se como positivos valores de cT < 40. O grau de positividade (carga viral) de cada tipo de amostra foi também comparado.
Os resultados mostraram que os zaragatoas das amígdalas detetaram uma maior proporção de grupos positivos (100%) para o vírus da PRRS do que as amostras de raspado orotonsilar obtidas aos 140 dias de idade e em comparação com os resultados obtidos com soro e fluido oral (66,6%). Além disso, os zaragatoas das amígdalas positivas apresentaram um valor médio de cT mais baixo (30,7) em comparação com o soro (35,6) e o fluido oral (35,5).
Rácio de deteção de PRRSV
| Tipos de amostras | 10 semanas | 20 semanas |
|---|---|---|
| Sangue | 100 % | 65,51 % |
| Fluído oral | 100 % | 65,51 % |
| Zaragatoa das amígdalas | 100% |
Valor ct médio de PRRSV
| Tipos de amostras | 10 semanas | 20 semanas |
|---|---|---|
| Soro | 23,16 | 35,67 |
| Fluído oral | 27,00 | 37,00 |
| Zaragatoa das amígdalas | 30,67 |
No estudo realizado com animais individuais cronicamente infetados, as taxas de deteção foram mais elevadas nos zaragatoas amigdalianas (61,5%) em comparação com o soro (7,7%) e os raspagens traqueobrônquicas (30,8%). A carga viral média das amostras positivas foi superior nos zaragatoas amigdalianas e nas lavagens traqueobrônquicas (cT 34,1 e 33,0, respetivamente) do que nas poucas amostras de soro positivas (cT 36,0).
| Muestra | Negativos | Positivos | Ct médio |
|---|---|---|---|
| Raspagem traqueobronquial | 50 (33,56%) | 4 (30,77%) | 33,50 |
| Zaragatoas amigdalianas | 46 (30,87%) | 8 (61,54%) | 34,13 |
| Soro | 53 (35,57%) | 1 (7,69%) | 36,00 |
Esta nova técnica de amostragem pode fornecer uma ferramenta útil para melhor compreender a dinâmica da infeção em porcas infetadas com estirpes virulentas, dada a eliminação viral prolongada que pode ser observada, especialmente perto do parto, e o seu potencial papel na transmissão do vírus à descendência.
Num futuro próximo, a sua utilidade poderá ser avaliada noutros cenários, como a aclimatação de nulíparas, a eliminação de animais portadores em programas de erradicação e a sua capacidade de detetar e monitorizar outros agentes patogénicos, como o Mycoplasma hyopneumoniae ou o vírus da gripe suína.
