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Testes disponíveis
Cultivo bacteriano
- Isolamento de organismos vivos
- Tipo de amostra: fezes, conteúdo intestinal.
- Prós:
- As bactérias são fáceis de cultivar num 1 dia
- Fácil de fazer em qualquer laboratório (inclusive interno)
- Custo relativamente baixo
- Contras:
- Algumas E. coli fazem parte da flora intestinal normal
- Os porcos têm múltiplas E. coli ao mesmo tempo
- Se os porcos foram tratados antes com antibióticos, isto pode impedir o crescimento bacteriano
Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)
- Teste in vitro: capacidade de um organismo vivo para crescer sob concentrações específicas de diferentes antimicrobianos
- Tipo de amostras: fezes, conteúdo intestinal
- Prós:
- Identificação de susceptibilidade ou resistência de estirpes específicas a antimicrobianos comuns
- Identificação de tendências de resistência aos antimicrobianos
- Contras:
- Requer um isolado bacteriano
- Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo
- É possível que alguns antimicrobianos específicos não sejam incluídos ou requeiram testes especiais separados
- Custo moderado
Histopatologia
- Avalia a presença de lesões de tecido (dano) que podem confirmar a presença de doença. Às vezes, a presença de organismos também pode ser detectada directamente (bactérias e parasitas) ou indirectamente (vírus) usando colorações especiais adicionais.
- Tipo de amostra: tecidos.
- Prós:
- Associa adesão bacteriana com dano intestinal
- Nenhuma coloração especial é necessária
- Contras:
- Os tecidos intestinais precisam de fixação com formalina dentro de 15 minutos após a morte do animal. O tecido intestinal decompõe-se rapidamente.
- A doença pode ser segmentar, portanto devem ser enviadas várias amostras intestinais.
Genotipado
- Técnica de PCR (reacção em cadeia da polimerase), que detecta a presença de uma sequência específica de ácidos nucléicos (DNA) associada a genes de virulência conhecidos.
- Prós:
- PCR fácil de fazer.
- Ajuda a identificar a patogenicidade detectando a presença de genes (não necessariamente expressão génica) associados a factores de virulência.
- Genes de toxina: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e.
- Genes Pilus: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6).
- Genes de adesão: AIDA, EAEA, PAA.
- Facilita a seleção adequada da vacina (baseada em pili).
Genes de E. coli detectados por genotipificação por PCR e pela sua função
| Gene | Tipo | Descrição |
|---|---|---|
| EAST1 | Toxina | A toxina intestinal liga-se ao mesmo receptor e estimula a mesma via secretora que a Sta (a causa da diarreia não está bem estabelecida) |
| LT | Toxina | Toxina intestinal que estimula a secreção intestinal |
| STa | Toxina | Toxina intestinal que estimula a secreção intestinal principalmente em porcos jovens (diminui a absorção de água e electrólitos) |
| STb | Toxina | Toxina intestinal que estimula uma diarreia secretora principalmente em porcos de mais idade (aumenta a secreção dos enterócitos) |
| Stx1 | Toxina | O tóxico intestinal pode encontrar-se em estirpes patogénicas e não patogénicas |
| Stx2 | Toxina | O tóxico intestinal pode encontrar-se em estirpes patogénicas e não patogénicas. |
| Stx2e | Toxina | Toxina sistémica que induz dano vascular e doença dos edemas. |
| F18 (F107) | Adhesina | Pili (fimbria) utilizado para adesão que está presente depois dos 20 dias de idade e frequentemente associado com diarreia pós-desmame e doenças dos edemas |
| F41 | Adhesina | Pili (fimbria) usada para a adesão principalmente em recém-nascidos. |
| K88 (F4) | Adhesina | Pili (fimbria) usada para permitir adesão desde o nascimento a todas as idades. |
| K99 (F5) | Adhesina | Pili (fimbria) usada para a adesão principalmente em recém-nascidos. |
| 987P (F6) | Adhesina | Pili (fimbria) usada para a adesão principalmente em recém-nascidos. |
| AIDA | Adhesina |
"Adesina envolvida na aderência difusa" não fimbrial, mais frequentemente encontrada junto com F18. |
| EAE | Adhesina | Adesina não-fimbrial que contribui para as lesões de adesão "attaching-and-effacing" |
| PAA | Adhesina | Adesina não-fimbrial essencial para que se produzam as lesões de adesão "attaching-and-effacing" . |
- Contras:
- Requer um isolamento bacteriano.
- Os porcos podem ter mais de uma estirpe ao mesmo tempo pelo que devemos esperar que tenhamos isolado a estirpe correcta.
- Preço moderado, mas normalmente apenas é analisada uma estirpe isolada
Interpretação de resultados
Cultivo bacteriano
- A interpretação da hemólise depende da idade dos animais:
- Pré-desmame: E. coli. não hemolítico
- Pós-desmame: E. coli hemolítica.
- Pureza:
- Crescimento puro: altamente sugestivo de que está a contribuir para a doença.
- Crescimento misto: valor questionável.
- Quantidade:
- Alto: altamente sugestivo de que está contribuindo para a doença.
- Moderado: interpretação variável.
- Baixo: valor questionável (pode ser um contaminante).
- Sem crescimento: Animal possivelmente previamente tratado com antibióticos ou agente sem contribuição significativa.
Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma):
- Susceptível: Possível boa escolha para o tratamento se o antimicrobiano puder atingir o tecido-alvo.
- Resistente: um antimicrobiano diferente deve ser selecionado.
- MIC: se for realizada a MIC (concentração inibitória mínima), certifique-se de que o antimicrobiano seleccionado atinge o valor de MIC indicado no órgão alvo.
Histopatologia
- Positivo: Forte associação como causador se for capaz de demonstrar lesões intestinais com E. coli aderida a células epiteliais.
- Negativo: Sem lesões intestinais.
Genotipado
- O genotipado é muito valioso para identificar se a E. coli isolada contém algum dos factores de virulência que apoiariam o isolado como agente patogénico.
Cenário
Porcos com diarreia (qualquer idade) :
- Recolha de zaragatoas rectais de 2 ou mais porcos com diarreia não tratados com antibióticos e envie-os para cultura bacteriana, antibiograma e genotipagem.
- Eutanásia 1-3 leitões com diarreia que não receberam tratamento. Recolha imediatamente 3 amostras de intestino de cada leitão e colocá-las em solução de formaldeído. Recolha amostras frescas de intestino para enviá-las refrigeradas para cultura bacteriológica, antibiograma e genotipagem.
